一、細胞周期檢測
1.概念
細胞周期是指細胞從上一次分裂完成開始,到下一次分裂完成時為止,包括兩個階段:分裂間期和分裂期。細胞周期檢測的是單個細胞的增殖速度,通過縮時攝影來測定。
2.原理
細胞在不同的時期,細胞所含的DNA量不同。正常細胞的二倍體含量通常為2N,則在G/G1期,細胞的DNA量為2N,而G2/M期細胞DNA含量為4N。S期DNA量為2N—4N。碘化丙錠(PI)可以與細胞內的DNA和RNA結合,通過RNA酶將RNA消化后,檢測到與DNA結合的PI熒光強度可以直接反映細胞內DNA含量的多少。因此,采用流式細胞術PI染色法檢測細胞內DNA含量時,可將細胞周期分為G/G1期、S期和G2/M期,并通過特殊軟件計算各時相的百分比。
細胞周期檢測結果展示
二、細胞克隆實驗
1. 概念
細胞克隆,又稱為細胞集落,指的是單個細胞在體外增殖6代以上,其后代所形成的細胞群體。細胞克隆實驗的目的是檢測細胞的增殖能力、細胞侵襲性、對殺傷因素敏感性等項目的重要技術方法。
2.原理
接種細胞后,只有同時具有貼壁和增殖活力的細胞才會形成克隆??寺⌒纬陕史从臣毎莫毩⑸婺芰Φ膹娙酰糜谠u價細胞群體依賴性和增殖能力??寺⌒纬陕逝c接種密度有一定關系,在進行測定時需要將接種的單個細胞分散為懸液,并直接接種在培養(yǎng)皿中進行持續(xù)一周以上的培養(yǎng),并在此期間進行檢查。當出現(xiàn)新的、由單個原始生長出來的完整幾何結構時,則可以停止培養(yǎng)過程。
細胞克隆結果展示
三、細胞凋亡實驗
1.概念
細胞凋亡是指細胞在一定的生理或病理條件下,受內在遺傳機制控制,按照自身程序主動性、生理性的死亡過程。細胞凋亡受凋亡相關基因調控,故又稱為程序性細胞死亡。
2.原理
一般而言,細胞凋亡的早期主要涉及胞內一些蛋白質的變化,如蛋白質量的增加、位置的轉移、狀態(tài)的改變等,還有一些磷脂和Ca2+含量的變化;中晚期則伴隨著DNA斷裂和凋亡小體的形成;而整個凋亡過程中細胞形態(tài)也會發(fā)生改變。
四、細胞侵襲實驗
1.概念
細胞侵襲實驗是將細胞小室(Transwell小室)放入培養(yǎng)板中,上室(細胞小室)內盛裝上層培養(yǎng)液,下室(培養(yǎng)板)內盛裝下層培養(yǎng)液,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。將細胞種在上室內,由于聚碳酸酯膜的通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內的細胞,從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。
2.原理
細胞侵襲指細胞在原位突破基底膜,然后內滲進入血管、淋巴管的過程。
細胞侵襲結果展示
五、細胞遷移實驗
1. 概念
細胞遷又稱為細胞移動、細胞爬行或細胞運動,是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。
2. 原理
細胞遷移實驗是測定細胞遷移運動與修復能力的方法,類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央區(qū)域劃線,去除中央部分的細胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設定的時間,取出細胞培養(yǎng)板,觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區(qū),以此判斷細胞的生長遷移能力,實驗通常需設定正常對照組和實驗組,實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)的修復能力,可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
細胞遷移實驗結果展示
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